• <del id="qqie6"><sup id="qqie6"></sup></del>
  • <tfoot id="qqie6"></tfoot>
  • <ul id="qqie6"></ul>
  • 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
    初級(jí)會(huì)員 | 第8年

    13524666654

    大鼠原代細(xì)胞(Primary cells)分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

    時(shí)間:2024/7/22閱讀:416
    分享:

         原代細(xì)胞(Primary cells)是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。組織主要指組織器官、外周血及胚胎等。由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)(一般10代以內(nèi))。

    實(shí)驗(yàn)步驟:
    1.取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
    2.在超凈工作臺(tái)中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。
    3.將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
    4.用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。
    5.大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
    6.室溫1 000×g離心8min,去上清液。
    7.沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。
    8.沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。
    9.沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。
    10.靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM
    漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。
    加入DMEM全培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

    會(huì)員登錄

    ×

    請(qǐng)輸入賬號(hào)

    請(qǐng)輸入密碼

    =

    請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

    收藏該商鋪

    X
    該信息已收藏!
    標(biāo)簽:
    保存成功

    (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

    常用:

    提示

    X
    您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
    在線留言
    主站蜘蛛池模板: 欧美成人精品第一区二区三区| 成人免费观看高清在线毛片| 国产成人无码av片在线观看不卡| 成人免费视频网站www| 成人欧美一区二区三区黑人| 国产成人黄色在线观看| 四虎成人永久地址| 欧美成人片一区二区三区| 成人中文字幕一区二区三区| 国产成人久久综合热| 欧美成人免费公开播放欧美成人免费一区在线播放| 欧美成人午夜免费完成| 成人欧美日韩一区二区三区| 国产成人无码AV一区二区 | 国产成人无码免费看片软件| 国产成人久久精品麻豆二区| 无码成人精品区在线观看| 国产成人h片视频在线观看| 成人片黄网站色大片免费观看app| 国产成人天天5g影院| 最新69堂国产成人精品视频| 亚洲AV成人噜噜无码网站| 成人午夜私人影院入口| 青青国产成人久久激情911| 国产成人亚洲毛片| 成人无码免费一区二区三区| 91嫩草私人成人亚洲影院| 国产成人AV无码精品| 国产成人精品综合| 成人精品一区二区三区中文字幕| 久久亚洲最大成人网4438| 国外成人免费高清激情视频| 爱情岛永久地址www成人| 亚洲成人在线免费观看| 四虎成人免费影院网址| 国产成人欧美一区二区三区| 国产精品欧美成人| 成人免费在线观看| 小明天天看成人免费看| 国产成人综合美国十次| 国产成人涩涩涩视频在线观看免费 |