ELISA試驗之洗板過程解說

洗板 目的在于將特異性結合于固相上的抗原 (抗體) 與溫育過程中吸附的非特異性成份分離，使免疫復合物與待測抗體 (抗原) 呈一定比例，洗板是否合格直接影響檢測結果的準確性。洗板應嚴格按照說明控制洗板時間及洗板次數， ELISA 檢測一般用洗滌液洗板 3 次，洗滌液應嚴格按照操作說明進行稀釋，洗液應注滿每個微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出現假陰性及假陽性結果。使用洗板機洗板可一定程度上避免環境污染、提高工作效率，洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內全部液體，嚴格按照要求設置一定的洗板時間及洗板次數。洗板過程中注意沖力大小，避免沖力過大導致酶結合物丟失，吸光度值偏低。洗液應根據不同廠家的酶標板調整注水量，注意不要溢出孔外；稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中，使配出的洗液 pH 在 7.2～7.6 范圍內，用非金屬容器保存，保持液體新鮮無污染、沉淀。洗板結束后將板拍干，應垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上，且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板注意事項：

1. 需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于 2μl；

2. 及時更換破損吸液針，避免破壞底板包被；

3. 針對不同廠家酶標板注意調整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標板；

4. 注意調整洗液量，洗液量過多將溢出，過少將達不到洗滌效果；

5. 關機前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結晶物堵塞管道；

6. 不同種試劑盒的洗液嚴禁混合使用。臨床操作中，工作人員由于擔心洗板次數過少達不到去除非特異性物質的理想效果而增加洗板次數，最近研究發現，隨著洗板次數的增加樣本檢測的 OD 值降低，造成假陰性結果及灰區標本的漏檢。

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