擴(kuò)增曲線的四個(gè)時(shí)期解釋

    擴(kuò)增曲線是描述PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過(guò)程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。

理論上PCR過(guò)程中反應(yīng)產(chǎn)物是以指數(shù)增長(zhǎng)的，但隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加，DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反應(yīng)副產(chǎn)物阻礙反應(yīng)等原因，致使PCR的擴(kuò)增效率降低，產(chǎn)物生成的速度逐漸減緩，因此擴(kuò)增曲線是一條“S形"曲線。

擴(kuò)增曲線可以分成四個(gè)時(shí)期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺(tái)期。

基線期：擴(kuò)增曲線的水平部分，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物生成量的變化。

指數(shù)期：PCR指數(shù)擴(kuò)增期，擴(kuò)增曲線起峰，每個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關(guān)系，PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系。

線性期：PCR反應(yīng)后期，由于PCR反應(yīng)體系各成分的消耗、產(chǎn)物抑制等因素的影響，反應(yīng)效率降低，產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關(guān)系。

平臺(tái)期：PCR反應(yīng)停止，PCR產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響PCR擴(kuò)增的因素錯(cuò)綜復(fù)雜，每個(gè)反應(yīng)進(jìn)入平臺(tái)期的時(shí)間和平臺(tái)期的高低都各不相同。