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    單克隆抗體的性質鑒定方法

    時間:2023/8/28閱讀:384
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         當獲得多個雜交瘤細胞株時,要了解哪一株是zui適用的,則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有:

        (一)Ig類型測定

        通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進行測定,確定其Ig類型或Ig亞類型別。

        (二)特異性測定

        把與相應抗原有關的物質同McAb進行多種免疫學檢測,鑒定McAb的特異性。這直接關系到McAb應用的可靠性。

        (三)抗體效價測定

        效價以腹腔積液或培養液的稀釋度表示,稀釋度越高,則抗體效價也越高。在凝集反應中,腹腔積液效價可達5萬以上;在ELISA中,腹腔積液效價可達100萬以上。如ELISA效價低于10萬,用于診斷測定將不會達到很高的敏感度,應重新制備。

        (四)表位測定

        通過雙向瓊脂擴散法,把兩種McAb混合,加入于同一孔中,對孔放相應的抗原,如出現兩條沉淀線可證明兩者為抗不同表位的McAb;利用ELISA雙抗夾心法,將一種McAb作包被抗體,另一作酶標記,其中加入抗原,如顯色,則證明兩者抗不同的表位。

        (五)親和力測定

        只有當抗原與抗體結合部位結構wan全吻合時,抗體的親和力。這種結合力以抗原抗體反應平衡時,抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復合物濃度之比表示。如親和力太低,會嚴重影響測定的敏感性。

        (六)染色體分析

        正常鼠的脾細胞染色體數:40,全部為端著絲粒;小鼠骨髓瘤細胞染色體:SP2/0細胞為62—68,NS-1為54~64。大多數為非整倍性,有中部和亞中部著絲點。雜交瘤細胞的染色體數目接近兩親本細胞染色體數目的總和,在結構上多數為端著絲粒染色體外.還應出現少數標志染色體。染色體數目多且較集中的雜交瘤細胞分泌高效價的抗體。

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