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    初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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    熒光定量PCR擴(kuò)增曲線四個(gè)時(shí)期

    時(shí)間:2023/8/7閱讀:1176
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       擴(kuò)增曲線是描述PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線,以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo),以反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。

    理論上PCR過程中反應(yīng)產(chǎn)物是以指數(shù)增長(zhǎng)的,但隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加,DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反應(yīng)副產(chǎn)物阻礙反應(yīng)等原因,致使PCR的擴(kuò)增效率降低,產(chǎn)物生成的速度逐漸減緩,因此擴(kuò)增曲線是一條“S形"曲線。

    擴(kuò)增曲線可以分成四個(gè)時(shí)期:基線期,指數(shù)期,線性期,平臺(tái)期。

    基線期:擴(kuò)增曲線的水平部分,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物生成量的變化。

    指數(shù)期:PCR指數(shù)擴(kuò)增期,擴(kuò)增曲線起峰,每個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關(guān)系,PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系。

    線性期:PCR反應(yīng)后期,由于PCR反應(yīng)體系各成分的消耗、產(chǎn)物抑制等因素的影響,反應(yīng)效率降低,產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關(guān)系。

    平臺(tái)期:PCR反應(yīng)停止,PCR產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響PCR擴(kuò)增的因素錯(cuò)綜復(fù)雜,每個(gè)反應(yīng)進(jìn)入平臺(tái)期的時(shí)間和平臺(tái)期的高低都各不相同。





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