ELISA試驗包被各條件選擇介紹

1.包被抗原的選擇

包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。 天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特 異性反應使抗原固相化)。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板 上，一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯，偶聯物吸附于固相載體上。

2.包被液的選擇

一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。

3.包被溫度的選擇

通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。

4. 包被濃度的選擇

包被的適濃度隨固相載體和包被物的性質變化，一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物 是高活性的，操作時洗滌徹di，不經封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中，封閉一般是必須的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、 10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內使用，不宜長期保 存，所以ELISA試劑盒中較少使用。