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  • 上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
    初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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    細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟

    時(shí)間:2022/2/22閱讀:519
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    在實(shí)際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

    細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:

    1.佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出冷凍管。

    2.迅速放入37℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在1分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌下取出細(xì)胞。

    3.在150g速度下離心5~10分鐘,棄去上層液

    4.加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度1×109 cell/L,置37℃溫箱靜置培養(yǎng)

    5.次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況。

    6.若細(xì)胞密度較高,及時(shí)傳代。

    注意事項(xiàng)

    在細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí),應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時(shí)搖動(dòng)冷凍管,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,生長(zhǎng)及形態(tài)良好。


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