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    轉基因大豆EPSPS基因核酸檢測試劑盒原則

    時間:2022/1/28閱讀:211
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    PCR試劑盒原則:

    1、引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

    2、引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

    3、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

    4、避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

    5、引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

    6、引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

    7、引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

    8、引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

    9、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

    10、避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

    11、引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

    12、引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

    13、引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性


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