人正常組織細胞復蘇的原則

人正常組織細胞細胞凍存：
 

人正常組織細胞待細胞生長狀態良好時，可進行293/HEK-293細胞|細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細胞吸走)，加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

人正常組織細胞復蘇的原則：

快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。復旦細胞庫全國各地均可發貨，全國統一價格，本公司出售的所有細胞僅供科研使用。

人正常組織細胞操作規程：

一．養基及培養凍存條件準備：

1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：