PCR檢測(cè)試劑盒基本原理及結(jié)構(gòu)組成

PCR檢測(cè)試劑盒基本原理：

通過(guò)大量對(duì)比某一種細(xì)菌或病毒的基因，得到該細(xì)菌或病毒共同保守序列，根據(jù)該序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增，即可獲得相應(yīng)大小的片段，以此來(lái)檢測(cè)該細(xì)菌或者病毒的感染/污染狀態(tài)。

PCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)組成：

①    10mM dNTP；

②    5×Taq 聚合酶buffer(包含引物F和R)；

③    Taq 聚合酶；

④    陽(yáng)性對(duì)照DNA；

⑤    陰性對(duì)照DNA；

⑥    加樣緩沖液；

⑦    滅菌超純水。

⑧    常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

PCR檢測(cè)試劑盒操作流程如下：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。