人elisa試劑盒實驗原理及要求

人elisa試劑盒試驗原理：

試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

人elisa試劑盒 操作程序：

    1. 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。

    2. 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。。

    3. 取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

    4.測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    5.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。

人elisa試劑盒樣本處理及要求：

    1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

    2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

    3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

    注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。