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    細菌轉化實驗次序

    時間:2020/1/8閱讀:458
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    細菌轉化指某一受體細菌通過直接吸收來自另一供體細菌的含有特定基因的脫氧核糖核酸(DNA)片段,從而獲得了供體細菌的相應遺傳性狀,這種現象稱為細菌轉化。自然界的轉化現象,一般發生在同一物種或近緣物種中。細菌轉化方法已被引入其他生物,例如采用原生質體轉化法,可將外源DNA注入到不具攝取DNA能力的生物中,使其獲得某些新的特性。
    實驗步驟
    1. 準備平板: 每組:1塊LB平板,2塊LB/amp平板,1塊LB/amp/ara平板
    2. 準備感受態細胞:用250μl無菌水或轉化液懸浮試劑盒中提供的大腸桿菌菌粉,此即感受態細胞。
    3. 活化受體細胞:挑取1環E.coli K12 HB101菌液,于LB培養基上37℃活化16-24h。 
    4. 轉化:1)在兩只無菌離心管上分別標 
    記+DNA, -DNA。 2)在上述兩管中分別加入 250μl轉化液。 3) 迅速置于冰上。 4)各挑取活化好的受體菌的一 個單菌落,懸浮于兩管轉化液中。 5)在標有+DNA的管中加入一 環質粒DNA,而標有-DNA的管中不加。 6)細菌轉化將上述兩管于冰上放置10min。7)在準備好的培養基底部如左圖。

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