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    3磷酸肌醇(IP3試劑盒操作步驟方法

    時間:2019/8/23閱讀:232
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                               3磷酸肌醇(IP3試劑盒操作步驟方法

    不知為什么,一直很喜歡“仲夏夜之夢”這首曲子,除了那飄揚的音符深深地吸引我之外,尤其是曲名,給我夢幻而又夢似霧的感覺,特殊而熟悉……好遙遠好遙遠。

    操作步驟:

    1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

    2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

    3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

    4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

    7.溫育:操作同 3。

    8.洗滌:操作同 5。

    9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.

    10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

    11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

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