培養基的制備

培養基的制備:

1.培養基用水

　　培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。

2.稱量

　　稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養基。

3.復水

　　復水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞，并可產生有毒物質，如發現焦化，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基即不能使用，應重新制備。對于瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。

4.滅菌

　　一般培養基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15min，含糖或特殊培養基，按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。

5.pH測定

　　微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值，即培養基使用前的pH，并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調整，注意不可反復調pH，否則會影響培養基的滲透壓。

6.配制好的培養基保存

　　滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完，應于冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。