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    ?PCR檢測試劑盒總RNA提取流程

    時間:2022/2/15閱讀:345
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    PCR檢測試劑盒總RNA提取流程:
    取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入試劑,嚴格按照說明書的流程進行。
    (1)加試劑(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
    (2)移入1.5mlEP管中,4oC 13000g離心10min。
    (3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
    (4)加入0.2ml1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
    (5)4oC 12000g離心15min。
    (6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
    (7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
    (8)4oC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
    (9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
    (10)4oC 11000g離心5min。
    (11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
    (12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20oC凍存備用。
    (13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
    (14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。

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