細胞的傳代培養常見問題解答

細胞傳代：細胞在培養過程中不斷增殖，培養皿/瓶空間有限，當細胞接觸過密，生長就會受到抑制，影響細胞狀態，因此我們要把其中一部分細胞分到別的培養皿/瓶里。

常見問題解答：

Q：為什么我們總說選擇對數期細胞傳代?

A：如下圖：細胞的生長和分裂，一般遵循以下模式：停滯期，對數期(指數期)，平穩期(平臺期)和衰退期。為了確保活力，遺傳穩定性和表型穩定，必須使細胞保持在對數期。

Q：那如何確定細胞對數期?

A：根據上述細胞生長曲線，為了確保活力，必須使細胞保持在對數期就傳代，所以一定不能等到細胞長滿100%融合時才去消化傳代。一般細胞長到 70% -80%左右即可傳代。

Q：一般細胞傳代都是1分2嗎?

A：要根據不同細胞而定，如有的生長很快，比如說4T1細胞，傳代取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又特別慢，比如 BT474。此時我們就要多觀察摸索最合適的傳代比例。

Q：消化很關鍵嗎?

A：不得不說，細胞狀態差，很多時候與傳代時胰酶消化密切相關。一般腫瘤細胞消化1-2min即可。但是每一種細胞貼壁能力不同，因此對胰酶的反應也不同，我們需要密切跟蹤。一般肉眼觀察到貼壁細胞層能移動即可終止;而非細胞全部分散成單個。如下圖分別是正確和錯誤的消化時間：

Q：部分比較難消化的細胞怎么辦?

A：可放于37℃培養箱消化。以MDA-MB-231/PAX紫杉醇耐受細胞為例，放于37℃培養箱消化5-8min，輕輕拍打，才見細胞成片移動，因此針對難消化細胞一定要在顯微鏡下密切觀察。

Q：幾天換培養基?

A：正常情況下，培養液偏紅色。如果細胞維持在pH6.5～6.6條件下，培養基變黃，說明培養液中代謝產物已堆積到一定量，細胞會脫落死亡，需要更換新鮮培養液。一般細胞生長旺盛時1～2天換一次，生長緩慢時，3～4天亦可。針對復蘇后的細胞，建議隔天換液。

Q：每天觀察細胞有必要嗎?

A：一般的腫瘤細胞我們是隔天傳代，但是切不可忽略對細胞的觀察，一定要每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。

Q：如果細胞形態不清晰或有異物等，如何處理?

A：可以考慮如下操作：首先，倒掉舊的培養基，用新的培養基或者PBS洗滌2-3次，再開始正式的消化、吹打。其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養瓶內。后續再密切觀察。

Q：細胞污染怎么辦?

A：如發現細胞有污染，一般建議丟棄。如果細胞非常寶貴，可試著加入含抗生素的培養基反復清洗，并用抗生素含量高的培養基培養，并經常更換培養基;