詳談ELISA試劑盒HRP底物分類

ELISA試劑盒靈敏性判斷的話，因為各種ELISA試劑盒的機能之間沒有明顯的水平差異，但是在InBios試劑盒檢測到的數據體現愈甚的原尺度低（P / N <10）以及介質（10≤P / N <20）CDC JEV IgM抗體陽性標本的XCyton套件。不亂性包含長期不亂性，開蓋不亂性，運輸不亂性，有必要還要添加熱加速不亂性等。拿核酸類試劑來說，敏捷度有的時候叫*低檢測線，就是拿一個已知濃度樣本稀釋下去，直到試劑盒檢測不出來為止，從而得到該試劑盒敏捷度到什么程度，特異性就是用該試劑盒檢測與目的病原微生物在相同感染部位的陰性樣本，檢測試劑盒是否泛起假陽性結果，精密型比較簡樸，檢測一份接近但高于*低檢測線樣本重復十次，計算CV值，一般核酸類試劑要求小于5%，酶免不清晰。 假如要判定ELISA試劑盒的敏捷度，樣品應該著眼于四周的疾病預防控制中央的數據為根據，對試劑盒的敏捷度進行了分析，通過對比套件結果與CDC日本腦炎病毒IgM抗體陽性的結果，以及從疾病的發病樣品采集的天數分類，有著明顯的機能差異。通過試劑盒的檢測結果與CDC日本腦炎病毒IgM抗體陽性的結果進行了對比確定的尺度：分為低、中、高，其主要依據是看比例。

底物范圍較廣，包括二氨基聯苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。HRP底物范圍較廣，包括二氨基聯苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。

一、二氨基聯苯胺／金屬鹽

DAB是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產生強烈的棕色產物，在水和醇中不溶解。多數情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過氧化物酶可以更加敏感。此類反應產物呈暗藍灰色至黑色，且在水及醇中穩定。DAB／金屬鹽染色應用的組織染色范圍較廣。

1.     需要的溶液和特殊設備

DAB，0.05 mol／LTris緩沖液(pH7.6), 0.3％ (W/V) 氯化鎳/水貯存液, 30％過氧化氫, DPX, 光學顯微鏡(通常帶有照相機以便于記錄結果).

2.     操作步驟

(1) 用 9 mL 0.05 mol/L Tris緩沖液(pH7.6)溶解6 mg DAB；

(2) 加 l mL 0.3％(W/V)氯化鎳/水貯存液(也可以用等量的氯化鈷替代)；

(3) 加0.1 mL 3％過氧化氫。過氧化氫一般以30％的溶液提供，貯存在4 ℃，此條件可以持續1個月；

(4) 如果出現沉淀，用濾紙過濾；

(5) 加此溶液至標本，并孵育1~20 min水洗終止反應；

(6) 優化：如果需要可復染；

(7) 用DPX封片。

二、氯萘酚

氯萘酚可以形成一種藍黑色產物。敏感性低于DAB，且產物可溶于醇中。它適用于當DAB反應形成較高背景或要求改變產物的顏色。

1.     需要的溶液和特殊設備

0.03％氯萘酚，用無水乙醇溶解(貯存在-20℃)，0.05 mol／LTris(pH7.6)，過氧化氫，Gelvatol或者Mowiol，光學顯微鏡(通常帶有照相機以便于記錄結果)。

2.     操作步驟

(1) 氯萘酚貯存液的準備：用10 mL無水乙醇溶解0.3 g氯萘酚，貯存于-20℃；

(2) 加100 μL 氯萘酚貯存液至10 mL 0.05 mol/LTris(pH7.6)；

(3) 加0.1 mL 3％過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30％的溶液提供，4℃可存放1個月；

(4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除；

(5) 加此溶液到標本中，并在室溫孵育10～40 min，水洗終止反應；

(6) 優化：如果需要，進行復染，但只可使用水溶性染料；

(7) 用Gelvatol或者Mowiol封片。

三、氨乙基咔唑

氨乙基咔唑(AEC)產生紅色產物，其敏感性低于DAB，但可用于DAB反應產生較高背景或要求改變產物顏色的實驗。此產物可溶于醇，但不溶于水。

1.     需要的溶液和特殊設備

0.4％ AEC用 N,N—二甲基甲酰胺(DMF)溶解， 0.1 mol/L乙酸鈉緩沖液(pH5.2)，過氧化氫， Gelvatol或Mowiol，光學顯微鏡(通常帶有照相機以便于記錄結果)。

2.     操作步驟

(1) 用 l mL DMF溶解 4 mg AEC。AEC在DMF中穩定，因此，可以用100 mL DMF溶解0.4 g AEC作為貯存液備用；

(2) 加 l mL AEC溶液至15 mL 0.1 mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.2)中，并攪拌；

(3) 加0.15 mL 3％過氧化氫于水中。過氧化氫一般是30％的溶液提供，在4℃可存放1個月；

(4) 用濾紙過濾；

(5) 加此溶液到標本中，并于室溫孵育10～40 min，水洗終止反應；

(6) 優化：如果需要復染，只可用水溶性染料；

(7) 用Gelvatol或Mowiol封片。