ATCC細胞操作采集及保存方法

ATCC細胞采集及保存：

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

ATCC細胞操作方法

（1）取成年新西蘭大白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后，取下兔子的雙腿，立即用75%乙醇浸泡。

（2）移入細胞房內，去除雙腿表面的皮毛及肌肉，剪取關節段，移至超菌工作臺內。

（3）PBS洗滌數次，用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。

（4）軟骨組織塊靜置5min，棄去上層液體及懸浮組織，將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒溫搖床中，振蕩消化15-20min；

（5） 4℃靜置5min；棄上清，PBS洗滌，去上清。加入0.2%膠原酶II，置入37℃的恒溫搖床中，振蕩消化2H；
（6）加入生長培養基終止消化，反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min，棄上清，用DMEM*培養基重新懸浮細胞, 放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

（7）細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。