elisa檢測試劑盒注意事項(xiàng)與操作步驟的方法

elisa檢測試劑盒原理及用途：

本elisa檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜等樣本中的鏈霉素（Streptomycin，SM），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的鏈霉素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗鏈霉素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含鏈霉素含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中鏈霉素的殘留量。

elisa檢測試劑盒注意事項(xiàng)：

1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4、底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6、在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8、任何反應(yīng)elisa檢測試劑盒不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9、不能使用過期產(chǎn)品。

10、如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準(zhǔn)備：

elisa檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

elisa檢測試劑盒操作步驟：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。