elisa檢測試劑盒操作步驟和注意事項

elisa檢測試劑盒操作步驟：

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。 

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘以內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.  依序每孔加終止溶液50ul，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

elisa檢測試劑盒注意事項：

1．  洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

2．  一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

3．  請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。

4．  如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。

5．在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

6．底物請避光保存。