上海邦景教您細胞是怎么轉染的

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上海撫生實業有限公司成立于2012年，經過數年的努力已迅速成為集科研和生產為一體的專業化生物工程公司。特別是ELISA研發，代測，技術服務這一產品已使上海撫生成為中國公司。小編為介紹細胞怎么轉染的方法及說明。

細胞傳代

1. 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

2. 棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。

3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。

4. 加入1ml的含血清培養基終止反應。

5. 用Tip頭多次吹吸，使細胞*分散開。

6. 將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。

7. 用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。

8. 將合適體積*培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。

9. 將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。

二、細胞轉染

1. 轉染試劑的準備

① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例（1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量）來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。

5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

6. 到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養基繼續培養24－48小時。

三、第二次細胞傳代

1. 在轉染后24小時，觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。

2. 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞重新轉入培養皿中。

3. 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。