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    摘要本文件規(guī)定了番茄及其制品(番茄醬、番茄汁、番茄丁、番茄沙司等)中的 5 種主要鏈格孢毒素(鏈格孢烯、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲基醚、細(xì)交鏈孢菌酮酸和騰毒素)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測法。

      【儀表網(wǎng) 儀表標(biāo)準(zhǔn)】由新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)學(xué)會提出,新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院、塔里木大學(xué)、中國科學(xué)院上海營養(yǎng)與健康研究所、中糧屯河番茄有限公司、阿克蘇天山神木果業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司等單位負(fù)責(zé)起草的《番茄及其制品中鏈格孢毒素的檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)已完成征求意見稿的編制,根據(jù)《新疆農(nóng)學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法(試行)》的相關(guān)規(guī)定,為保證標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性和適用性,現(xiàn)公開征求意見。
     
      在加工番茄生長、采收、貯運(yùn)、加工等過程中易受到病原微生物污染,特別是在貯藏期間,由鏈格孢屬真菌(Alternaria sp.)引起的番茄采后腐爛較重,不僅造成了極大的產(chǎn)量損失,還在番茄及其制品中積累了對人體健康有潛在威脅的鏈格孢毒素。其中,細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)的毒性和檢出含量都居各鏈格孢毒素之首,被美國食品藥物管理局列入有毒化學(xué)物質(zhì)登記冊,鏈格孢酚(alternariol, AOH)和鏈格孢酚單甲醚(alternariolmonomethyl ether, AME)具有急性毒性且可顯示協(xié)同效應(yīng)。2022年4月5日,歐盟發(fā)布(EU)2022/553號提議,用于修訂條例(EC)No401/2006 關(guān)于食品中鏈格孢毒素的監(jiān)測,監(jiān)測范圍包括加工番茄制品,規(guī)定了 AOH、AME 和 TeA 的限量值分別為 10、5、500 μg/kg。
     
      新疆作為世界第三大加工番茄生產(chǎn)基地,番茄加工企業(yè)眾多,但是目前均沒有開展鏈格孢毒素的檢測,究其原因,一方面是國家還沒有強(qiáng)制要求開展此項(xiàng)工作,另一方面是缺乏統(tǒng)一的檢測方法。因此,制定番茄及其制品中鏈格孢毒素的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法對于新疆加工番茄產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展很有必要。
     
      本文件按照GB/T 1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。參考GB/T 601 化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定 溶液的制備;GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法;GB/T 27417 合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南標(biāo)準(zhǔn);AOAC 2021 番茄、小麥和葵花籽中的鏈格孢毒素的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等規(guī)程編制。
     
      本文件規(guī)定了番茄及其制品(番茄醬、番茄汁、番茄丁、番茄沙司等)中的 5 種主要鏈格孢毒素(鏈格孢烯、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲基醚、細(xì)交鏈孢菌酮酸和騰毒素)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測法。
     
      本文件適用于番茄、番茄醬、番茄汁、番茄丁、番茄沙司等中的鏈格孢烯、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲基醚、細(xì)交鏈孢菌酮酸和騰毒素含量的測定和確證。
     
      方法原理:
     
      試樣中的鏈格孢烯、鏈格孢酚、鏈格孢酚甲基醚、細(xì)交鏈孢菌酮酸和騰毒素用甲醇/水/乙酸的混合溶液提取后,上清液經(jīng)固相萃取柱凈化,用超高壓液相色譜分離,串聯(lián)質(zhì)譜檢測,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。
     
      儀器和設(shè)備:
     
      1.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有 ESI 電離源、串聯(lián)四級桿質(zhì)量分析器。2.pH計(jì)。3.分析天平:感量0.01g、0.0001g。4.振蕩器。5.高速勻漿機(jī)。6.離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于3000r/m。7.固相萃取裝置,帶真空泵。8.漩渦混合器。9.減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。10.氮吹儀。
     
      試樣制備:
     
      取代表性樣品約1kg,將其可食用部分切碎后,用高速勻漿機(jī)將樣品加工成漿狀,混勻,裝入潔凈的樣品瓶中,密封并標(biāo)明標(biāo)記,于-18 ℃冷凍保存。(注:在制樣的操作過程中,應(yīng)防止樣品受到污染。)
     
      提取:
     
      稱取2g(精確至0.01g)試樣于50mL 離心管中,加入100μL 同位素混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,加入14.0mL 甲醇-水-乙酸溶液(5.8),振蕩器提取45min,3000 r/m離心10min,將上層甲醇提取液轉(zhuǎn)移7.5mL(等于1.0g樣品)于新的50mL離心管中,用 1%乙酸水溶液(5.4)等體積稀釋,待凈化。
     
      試樣溶液的測定:
     
      取7.2、7.3處理得到的待測溶液進(jìn)樣,內(nèi)標(biāo)法計(jì)算待測液中目標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量濃度,按8計(jì)算樣品中待測物的含量。試液中待測物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),超過線性范圍則應(yīng)根據(jù)測定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后重新測定。
     
      精密度:
     
      在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

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