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    非洲豬瘟檢測實驗方案常見故障排除方法

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      2025年06月19日
    關鍵詞
    非洲豬瘟檢測實驗方案,非洲豬瘟檢測
    上傳者
    山東博科儀器有限公司
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    資料簡介

      【BK-PCR08】山東博科儀器以客戶為中心,以服務為宗旨,以創(chuàng)新為動力。

      非洲豬瘟檢測實驗方案常見故障排除方法

      核酸提取環(huán)節(jié)故障排除

      核酸提取量低:若提取的核酸量不足,可能影響后續(xù)檢測。首先檢查樣本采集是否規(guī)范,如采集量過少或采集部位不當,需重新采集樣本。其次,查看核酸提取試劑是否過期或保存不當,若試劑變質(zhì)應更換新試劑。另外,提取過程中操作時間、溫度等參數(shù)未按要求執(zhí)行,也會導致提取量低,需嚴格按照操作流程進行。

      核酸純度差:核酸純度差可能含有雜質(zhì),影響PCR擴增。檢查提取過程中使用的試劑是否受到污染,如緩沖液中有雜質(zhì),需更換試劑。同時,注意離心操作是否充分,若離心轉(zhuǎn)速不夠或時間不足,雜質(zhì)不能有效分離,應調(diào)整離心參數(shù)。

      PCR擴增環(huán)節(jié)故障排除

      無擴增產(chǎn)物:出現(xiàn)無擴增產(chǎn)物的情況,先檢查引物是否設計合理,是否存在引物二聚體或與模板不匹配的問題,可重新設計引物或驗證引物序列。其次,查看PCR反應體系中各成分是否添加準確,如Taq酶、dNTP等是否漏加或添加量不足,需重新配制反應體系。另外,檢查PCR儀的溫度設置是否正確,如變性、退火、延伸溫度和時間是否符合要求。

      擴增產(chǎn)物條帶異常:若擴增產(chǎn)物條帶模糊、拖尾或出現(xiàn)非特異性條帶,可能是退火溫度不合適,可適當調(diào)整退火溫度。也有可能是Mg2?濃度過高或過低,需優(yōu)化Mg2?濃度。此外,模板DNA濃度過高也會引起非特異性擴增,應適當稀釋模板。

      電泳檢測環(huán)節(jié)故障排除

      條帶不清晰:電泳后條帶不清晰,可能是瓊脂糖凝膠濃度不合適,對于非洲豬瘟檢測產(chǎn)物,應選擇合適的凝膠濃度。另外,電泳緩沖液使用次數(shù)過多或過期,會影響電泳效果,需更換新的緩沖液。

      無條帶顯示:若電泳后無條帶顯示,檢查加樣是否準確,是否存在漏加或加樣量過少的情況。同時,查看電泳儀是否正常運行,電壓和電流是否穩(wěn)定。


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