細胞凍存的基本步驟

細胞凍存是一種將細胞在極低溫度下保存的方法，以最大限度地減少細胞損傷并保持其活性，以便未來能夠復蘇和使用。細胞凍存的基本步驟：

1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2.取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3.去除PBS，加入適量yi蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4.離心1000rpm，5min；
5.去除yi蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6.將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7.在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8.凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。