RAP-seq技術——無需特異性抗體，高效解析RNA-蛋白互作調控網絡

在細胞的生命活動中，RNA結合蛋白（RBP）與RNA的互作如同精密的“分子開關”，調控著mRNA的穩定性、翻譯效率及亞細胞定位等關鍵過程。無論是植物應對鹽堿干旱的逆境適應，還是人類疾病中的基因表達異常，這些生命現象的調控機制均與RBP與RNA的動態互作密切相關。然而，傳統技術如RIP-seq、CLIP-seq受限于抗體質量和通量瓶頸，難以高效解析這類互作網絡。

藍景科信RAP-seq技術：突破傳統的互作研究方案

RNA親和純化測序（RNA Affinity Purification Sequencing, RAP-seq） 是藍景科信自主研發的創新技術，通過體外重組蛋白表達-RNA親和捕獲-高通量測序的全流程設計，實現了RBP結合RNA的高效鑒定。

技術流程：

1. 重組蛋白制備：體外表達帶標簽（如HaloTag）的目標RBP；

2. RNA親和純化：重組蛋白與總RNA孵育，特異性捕獲互作RNA；

3. 高通量測序和分析：分離結合RNA，構建文庫并測序，解析互作轉錄本。

RAP-seq vs 傳統技術：三大優勢

RAP-seq的多維應用場景

l  植物逆境應答：解析RBP在干旱、鹽堿、高溫等脅迫下的調控網絡； 

l  發育生物學：追蹤胚胎發育、器官分化中的RNA-蛋白互作動態； 

l  疾病機制研究：篩選癌癥、神經退行性疾病中異常表達的RBP及其靶RNA； 

l  作物育種：鑒定調控產量、品質的關鍵RBP，輔助分子育種。 

應用案例：RAP-seq在植物逆境研究中的應用

案例一：胡楊耐鹽機制的分子解碼

文章標題：Populus euphratica GRP2 Interacts with Target mRNAs to Negatively Regulate Salt Tolerance by Interfering with Photosynthesis, Na⁺, and ROS Homeostasis

期刊：International journal of molecular sciences

技術應用：利用RAP-seq鑒定胡楊GRP2蛋白結合的mRNA，發現其通過靶向光合作用相關基因（如PETC、RBCMT）和抗氧化酶基因（SOD[Mn]、CDSP32），抑制耐鹽相關通路，揭示GRP2作為負調控因子的分子機制。

案例二：楊樹耐旱基因的互作網絡解析

文章標題：Rare variations within the serine/arginine-rich splicing factor PtoRSZ21 modulate stomatal size to determine drought tolerance in Populus

期刊：New Phytologist

技術應用：RAP-seq揭示PtoRSZ21蛋白直接結合自噬相關基因PtoATG2的mRNA，通過可變剪接調控氣孔發育，證明該蛋白通過重塑RNA互作網絡增強耐旱性。