培養基分裝滅菌操作方法和注意事項

來源：上海帝博思生物科技有限公司 2025年07月23日 07:36

　　培養基分裝是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由于微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質，是應用廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養基在98~100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反復融化，其凝固性降低。任何一種培養基一經制成就應及時滅菌，以備純培養用。一般培養基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。

　　培養基分裝滅菌操作方法和注意事項：

　　加水：打開滅菌鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。

　　裝料、加蓋：滅菌材料放好后，關閉滅菌器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。

　　排氣：打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5min，使鍋內冷空氣排凈。

　　升壓、保壓和降壓：當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恒溫，并開始計算滅菌時間，待時間達到要求(一般培養基和器皿滅菌控制在121℃，20min)后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。

　　滅菌后的培養基空白培養：滅菌后的培養基放于37℃培養箱中培養，經24h培養無菌生長，可保存備用；斜面培養基取出后，立即擺成斜面后空白培養；半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后，空白培養。

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