DAP-seq技術在ScAIL1靶向調控DELLA參與GA和JA信號通路的應用

來源：藍景科信河北生物科技有限公司 2023年11月15日 10:55

2022年8月20日，廣西大學亞熱帶農業生物資源保護與利用國家重點實驗室和廣西甘蔗生物學重點實驗室的最新研究成果，在學術期刊Journal of Experimental Botany上發表，文章題目為 “ScAIL1 modulates plant defense responses by targeting DELLA and regulating GA and JA signaling”。該期刊的影響因子為7.298。該研究使用DAP-seq技術鑒定了甘蔗ScAIL1轉錄因子靶向ScGAI啟動子區域的結合基序，進一步研究表明，ScAIL1通過靶向DELLA調控JA合成和GA失活來平衡植物生長和防御反應。

現代甘蔗是一種復雜的多倍體植物。DELLA是GA信號通路的抑制因子，通過與多種植物激素協同來調節植物的生長發育和防御反應。甘蔗ScGAI編碼一種調節莖稈發育的DELLA蛋白。甘蔗DELLA蛋白由位于chr1B和chr1C上ScGAI基因的兩個等位基因編碼。然而，ScGAI等位基因的啟動子是否相同，以及哪些轉錄因子通過與ScGAI啟動子結合介導ScGAI的轉錄尚不清楚。

該研究通過序列分析發現ScGAI等位基因在不同染色體上的轉錄受不同啟動子序列的調控，基序分析和GUS活性測定進一步證明不同的啟動子序列，其結合基序和轉錄活性也不同。隨后，采用酵母單雜交技術篩選到25個與ScGAI啟動子結合的潛在轉錄因子，并鎖定ScAIL1結合蛋白。ScAIL1是一個核定位的AP2家族轉錄因子。然后，酵母雜交、凝膠遷移率檢測、DAP-seq分析結果表明ScAIL1通過直接與ScGAI的兩個啟動子結合來調控ScGAI的轉錄。轉染甘蔗原生質體的實驗表明ScAIL1抑制了ScGAI的轉錄，這與雙熒光素酶活性測定結果一致。進一步通過BiFC，Co-IP和GST Pull Down實驗證明ScAIL1能夠與自身相互作用，因此ScAIL1可能是以二聚體的形式參與ScGAI轉錄過程的抑制。多種脅迫處理下，ScAIL1表達上調、GA信號增強、JA信號下降，這表明了ScAIL1調控ScGAI轉錄的潛在功能可能與植物的防御反應有關。為更好地了解ScAIL1參與植物防御反應的分子機制，研究人員構建了過表達ScAIL1的水稻。ScAIL1的過表達顯著提高了水稻對細菌枯萎病和水稻瘟病的抵抗力，同時阻礙了生長和發育。此外，在過表達ScAIL1的水稻中，與應激反應相關的基因顯著上調。內源性植物激素含量和基因表達分析進一步表明，ScAIL1過表達增強了水稻對細菌枯萎病和水稻瘟病的抵抗力，而不是促進生長，并且這種反應與JA合成和GA失活作用有關。這些結果為證明ScAIL1在植物防御反應中的作用與JA和GA信號傳導有關提供了分子證據。

圖1. ScAIL1定位于細胞核，并且直接靶向ScGAI啟動子，圖1F為DAP-seq分析鑒定的2個結合基序

圖2. ScAIL1調控JA合成和GA失活來平衡植物生長和防御反應的分子機制模式圖

綜上所述，該研究表明了甘蔗ScGAI的轉錄受兩個不同的啟動子調控，而ScGAI的轉錄被AP2家族轉錄因子ScAIL1抑制。ScAIL1是植物防御反應的正調控因子，ScAIL1通過負調控DELLA、增加JA合成和誘導GA失活來介導植物的防御反應。該研究揭示了ScAIL1通過調控GA和JA信號通路參與植物防御反應的新機制，也為復雜多倍體作物的基因轉錄調控研究提供了一個新視角。

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