如何選擇合適的流式抗體呢？

流式細(xì)胞術(shù)是一種在液流系統(tǒng)中，快速測(cè)定單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞器的生物學(xué)性質(zhì)，并把特定的細(xì)胞或細(xì)胞器從群體中加以分類(lèi)收集的技術(shù)。在細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞凋亡研究和免疫學(xué)方面起著非常重要的作用。隨著流式細(xì)胞術(shù)在不斷發(fā)展，流式抗體及熒光標(biāo)記產(chǎn)品的種類(lèi)、數(shù)量也在不斷增多，加上多色分析實(shí)驗(yàn)方案需求的增長(zhǎng)，逐漸產(chǎn)生了抗體難選擇、熒光難搭配等問(wèn)題。那么如何選擇合適的流式抗體呢？

1、抗體的選擇

流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
（1）確定所需檢測(cè)的指標(biāo)，目的細(xì)胞的特異性表面標(biāo)記或胞內(nèi)標(biāo)記；
（2）根據(jù)檢測(cè)樣本的種屬選擇抗體，流式抗體基本無(wú)法進(jìn)行種屬交叉反應(yīng)；
（3）根據(jù)抗體的說(shuō)明，明確是否可以用于流式實(shí)驗(yàn)。

2、確定儀器的參數(shù)配置

激光器：不同的流式細(xì)胞儀激光器不同，常見(jiàn)的有405nm，488nm和635nm，需要根據(jù)具體的儀器進(jìn)行確定。
濾光片：檢測(cè)通道的多少，決定最多可以同時(shí)檢測(cè)幾個(gè)指標(biāo)。熒光素的發(fā)射波長(zhǎng)與濾光片有關(guān)，所選擇熒光素要在儀器的可檢測(cè)范圍內(nèi)。
儀器：相同的熒光在不同的儀器上檢測(cè)通道可能不同，需要參照儀器的說(shuō)明。

3、流式熒光標(biāo)記的選擇

如果實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單一指標(biāo)：不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。用戶(hù)需根據(jù)檢測(cè)的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。
如果同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)：確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道：流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。

4、同型對(duì)照的選擇

流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和其他抗體相關(guān)實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)不同的就是需要選擇同型對(duì)照。同型對(duì)照，是用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色，相當(dāng)于實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照。同型對(duì)照選擇與標(biāo)記抗體同種屬來(lái)源，同亞型，同熒光標(biāo)記的抗體。比如：抗人的CD3的PE標(biāo)記的抗體，小鼠的IgG2a。同型對(duì)照選擇PE標(biāo)記的小鼠的IgG2a。
有時(shí)候同型對(duì)照的表達(dá)會(huì)比抗體的表達(dá)高，首先檢查同型對(duì)照的抗體是否加錯(cuò)類(lèi)型、劑量等。其次，因?yàn)橛行?biāo)志在細(xì)胞的表面或者胞內(nèi)表達(dá)不高，而跟其類(lèi)似的抗原非常多，那么同型對(duì)照非特異性的結(jié)合會(huì)超過(guò)抗體的特異性，所以會(huì)造成這種現(xiàn)象。這個(gè)時(shí)候推薦使用其他陰性對(duì)照，如空白對(duì)照等。

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