細胞侵襲實驗過程是怎么樣呢？

細胞侵襲發(fā)生在腫瘤細胞轉移的第一步，即腫瘤細胞在原位突破基底膜，那么細胞侵襲實驗過程是怎么樣呢？讓我們一起來了解一下吧！

一. 基質膠包被：

(a) 將基質膠置于冰中并在4℃融化，使用預冷的移液管或吸頭混合基質膠至均勻狀態(tài)。
(b) 在冰上，將基質膠用無血清培養(yǎng)液按照1:8的比例進行稀釋，例如取8µl基質膠加入64µl不含血清的培養(yǎng)液中，使用預冷的吸頭混合至均勻狀態(tài)。

注：常用的稀釋比例為1:4、1:6、1:8，可根據實驗具體情況調整稀釋比例。
(c) 取60µL上述混合溶液垂直加入細胞小室中，使其均勻平鋪在底部。

(d) 吸出未結合的基質膠。

(e) 加入100µl不含血清的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘，進行水化。
(f) 去除小室中液體，檢查是否有液體穿過小室進入到下室中，若沒有，則可用于接種細胞。

二. 細胞懸液的制備：
(a) 對細胞進行12-24小時的饑餓處理。（非必需步驟）
(b) 消化細胞，用不含血清的培養(yǎng)液重懸，調整細胞密度為5-50萬個/mL。

三. 細胞接種：
(a) 取500µL含10% FBS的培養(yǎng)液加入24孔板下室，用鑷子將細胞小室置于24孔板內。

(b) 取200µL細胞懸液加入細胞小室。
(c) 將24孔板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時。

四. 細胞固定、染色：
(a) 取出細胞小室，去除培養(yǎng)液，用棉簽輕輕擦拭基質膠及細胞。
(b) 在24孔板干凈的孔中加入600µl 4%多聚甲醛固定液，將小室放入固定20-30分鐘。
(c) 棄固定液，PBS洗滌小室1次。

(d) 在24孔板干凈的孔中加入適量結晶紫染色液，將小室放入染色5-10分鐘。
(e) 取出小室，PBS洗滌3次。

(f) 適當風干后，顯微鏡下觀察并計數。

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