大鼠5-羥色胺elisa檢測試劑盒技術原理

大鼠5-羥色胺elisa檢測試劑盒技術原理:

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

大鼠5羥色胺elisa檢測試劑盒操作時需注意事項：

1.標準品的稀釋與加樣

2.加樣：分別設空白孔空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將3048t的20倍倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048t的20倍倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應此時藍色立轉黃色。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度od值。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。