如何改進ELISA試劑盒實驗中的錯誤

ELISA試劑盒有許多實驗操作步驟，新手操作難免出錯。其中許多錯誤是由不充分的細節(jié)造成的。有很多方法可以減少這種錯誤，比如在做實驗時少說話，以防止唾液掉進酶的標簽中。當然，我們也要學會探索自己的問題，找出原因。那么，我們如何改進ELISA試劑盒實驗中的錯誤呢?

1.評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。

2.操作前仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數的掌握等。

3.加樣要準確、快速。加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。另外，顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

4.檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

5.使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

6.嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。

7.洗滌*，洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。

8.嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。