分享ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術

 公司技術專員為ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術報告做出一番整理，在這里分享給您供參考。
ELISA方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法：檢測抗原(體)的常見方法，應用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測 小分子半抗原)。
  2.間接法：檢測抗體的方法，利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結合的抗體。
  3.競爭法：檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，結果如待測抗原含量越多，與固相抗體結合的酶標抗原就越少，顯色越淺，二者呈負相關。
操作注意
① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
② 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
③ 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
ELISA試劑盒質控分析
1.人員培訓內容包括：
①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；
②熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環節及難點；熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；
③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數據處理的能力和質量控制知識；
④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經有關部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗。

2.基本了解
① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術應用于臨床檢驗發展為ELISA試劑盒技術。
② 特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質形成"免疫吸附劑"。
③ 酶標記免疫活性物質，進行信號放大；
④ 有二步溫育反應二次洗滌過程；
⑤ 靈敏度特異性相對較高。
⑥ 局限性：只能檢測到ng水平
⑦ 精密度差(批內CV15-20%)；
⑧ ELISA檢測試劑盒線性范圍窄(一個數量級)；
⑨ 存在"HD-HOOK"效應。