ATCC細胞染色體制備過程

組織ATCC細胞用于遺傳學分析zui常見的是體外培養(yǎng)的細胞株，多為惡性腫瘤細胞株，且呈貼壁生長，僅小數(shù)細胞株為懸浮生長。培養(yǎng)細胞有來源易得、細胞分裂率高和染色體標本制出清晰度高等優(yōu)點。組織細胞培養(yǎng)基染色體制備的關鍵是掌握好體外細胞的生長動態(tài)，只有處在對數(shù)生長期的細胞才能出現(xiàn)較高的分裂相，所以積水仙素處理的時機及量是染色體標本形態(tài)及分裂指數(shù)的關鍵。

1、實驗材料

培養(yǎng)基液（PRMI 1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養(yǎng)瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。

2、培養(yǎng)液配制

培養(yǎng)液85-95%

小牛血清5-15%

雙抗（選擇）100u/ml

3、操作過程

（1）培養(yǎng)基細胞：選擇處于指數(shù)生長期、用大瓶培養(yǎng)的80-90%匯合單層培養(yǎng)細胞；

（2）終止培養(yǎng)：當有大量圓形發(fā)亮細胞出現(xiàn)時，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養(yǎng)混合液，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6-10小時以抑制分裂期細胞停止于分裂中期；

（3）聚集細胞：

（A）搖動法：

可利用分裂中期細胞培養(yǎng)基變圓與底物附著不牢特點，此時可持培養(yǎng)瓶，左右反復橫向水平搖動，可使90%的中期分裂細胞從瓶壁脫落；

（B）消化法：

將培養(yǎng)液倒入離心管內(nèi)，給培養(yǎng)瓶內(nèi)加0.025%*液0.5-1ml/瓶，水平左右搖動，便培養(yǎng)瓶底壁面*接觸消化酶，稍后用彎頭吸管吹打，待細胞*脫落后，加入3-5ml前培養(yǎng)終止消化。用吸管移入裝有培養(yǎng)基液的離心管內(nèi)2000rpm10分鐘。棄上清液，留沉淀細胞；

（4）低滲處理：給沉淀細胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均勻，在溫箱中靜置20-30分鐘；

（5）預固定：向低滲處理適當?shù)碾x心管中加新鮮配制的3∶2甲醇，冰乙醇固定液1-2ml，用吸管輕松吹打調(diào)勻，此措施能起到使細胞表面輕微固定，可防止固定后細胞培養(yǎng)基粘連成塊。

（6）固定：800-1000rpm10分鐘，棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml，加入時要沿管壁慢慢加入，后輕輕吹打，封口后室溫靜置30分鐘以上，反復三次；

（7）制片：末次離心后，倒掉上清液，留沉淀ATCC細胞，加新鮮配制固定液0.5ml左右，混勻后*制片，其它同外周血方法。

Diethylcarbamazine Citrate 200mg 枸櫞酸乙胺嗪標準品 1642-54-2

Paramethasone Acetate 200mg 醋酸帕拉米松標準品 1597-82-6 

Sodium Iron EDTA 200mg 乙二胺四乙酸鐵鈉標準品 15708-41-5 

Drometrizole Trisiloxane 200mg 甲酚曲唑三硅氧烷標準品 155633-54-8

Methscopolamine Bromide 200mg *標準品 155-41-9 

Ritonavir 200mg *標準品 155213-67-5 

Pancuronium Bromide 200mg 泮庫溴銨標準品 15500-66-0 

Tripelennamine Hydrochloride 200mg 鹽酸曲吡那敏標準品 154-69-8 
ATCC細胞