elisa試劑盒實驗步驟

1. 血清收集保存： elisa試劑盒收集不抗凝血液3-5ml，保存4℃冰箱中，在恒溫離心機中 以4℃，3500r離心10min，收集上層血清，以200ul/管分管編號凍存-80℃冰箱中。

 2. 包被：用包被液（CBS）稀釋八種抗原至5ug/ml，以100ul/孔加入酶標板 中，空白孔加100ul/孔3%BSA+PBS.

3.. 封閉：棄上清液，加封閉液（5%BSA+PBST）200ul/孔，37℃放置2h。

4.. 洗滌：以洗滌液洗滌5次，5min/次。 elisa試劑盒加血清樣品：將凍存血清逐級解凍至室溫，將待測血清（1:30稀釋于 1%BSA+PBST）中，以100ul/孔加入酶標本中，37℃放置2h，陰性對照孔加100ul/孔稀釋液（1%BSA+PBST）.  

5.  洗滌：用洗滌液洗滌5次，5min/次。

6..  加酶標二抗：人抗IgG抗體-HRP,用1%BSA+PBST 液1：10000稀釋，100ul/孔，37℃恒溫箱溫育2h。  

7. 洗滌：洗滌液洗滌5次，5min/次。  

8.  顯色：加新鮮配制的底物（TMB：A液和B液等體積混合）100ul/孔。 10.  中止反應、比色：加50ul/孔中止液（2M H2SO4）， elisa試劑盒用酶標儀測定吸收值（450nm），根據P/N確定陽性值。 1 血清特異性IgE檢測  小鼠檢測完AHR后24h內處死動物，摘眼球取血，室溫下靜置30min，4℃4000rmp/min離心10min，小心吸取上層血清，分裝-80℃保存備用。采用間4℃放 置過夜12h上。