南京信帆生物：輕松捕獲microRNA的靶標

整個過程大致如下：

1. 創(chuàng)建miRNA模擬物。
2. 將這些miRNA模擬物和pMirTrap載體共轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞，并孵育24小時。同時利用miR-132、pMirTrap載體和pMirTrap對照載體開展對照轉(zhuǎn)染。
3. 利用附帶的MirTrap分離試劑盒裂解轉(zhuǎn)染后的細胞培養(yǎng)物。
4. 利用分離試劑盒中的磁珠對RISC復合物（其中包括靶標mRNA）進行免疫沉淀。
5. 利用附帶的NucleoSpin RNA XS試劑盒分離與磁珠結(jié)合的靶標mRNA。
6. 通過qPCR或新一代測序分析分離出的RNA，鑒定出特定miRNA的靶標mRNA。

MirTrap系統(tǒng)中包含了pMirTrap載體、免疫沉淀及后續(xù)分離所需的試劑、Xfect microRNA轉(zhuǎn)染試劑以及對照試劑，足夠15次分析使用。

Xfect microRNA轉(zhuǎn)染試劑也是Clontech推出的產(chǎn)品。它形成可生物降解的納米顆粒，從而實現(xiàn)miRNA的轉(zhuǎn)染。此試劑盒提供兩種轉(zhuǎn)染聚合物：Xfect MicroRNA Transfection Polymer，這是為小RNA的轉(zhuǎn)染而優(yōu)化的；Xfect Polymer，這是為質(zhì)粒DNA而優(yōu)化的。

在miRNA轉(zhuǎn)染時，只需要Xfect MicroRNA Transfection Polymer；而在miRNA與質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染時，須在轉(zhuǎn)染反應(yīng)中加入少量的Xfect Polymer。

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