南京信帆生物：利用沉淀實驗測定蛋白質等電點

蛋白質在PH等于等電點時，溶解度zui小。本文主要介紹了利用沉淀實驗測定蛋白質等電點的實驗原理、器材、試劑和具體操作步驟。
 

蛋白質PH位于等電點時溶解度zui低

一、蛋白質等電點的測定

1、目的

(1)了解蛋白質的兩性解離性質。

(2)學習測定蛋白質等電點的一種方法。

2、原理

蛋白質是兩性電解質。蛋白質分子的解離狀態和解離程度受溶液的酸堿 度影響。當溶液的pH 達到一定數值時，蛋白質顆粒上正負電荷的數目相等， 在電場中，蛋白質既不向陰極移動，也不向陽極移動，此時溶液的pH 值稱 為此種蛋白質的等電點。不同蛋白質各有其特異的等電點。在等電點時，蛋 白質的理化性質都有變化，可利用此種性質的變化測定各種蛋白質的等電 點。zui常用的方法是測其溶解度zui低時的溶液pH 值。

本實驗借觀察在不同pH 溶液中的溶解度以測定酪蛋白的等電點。用醋 酸與醋酸鈉(醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中)配制成各種不同pH 值的緩沖液。 向諸緩沖溶液中加入酪蛋白后，沉淀出現zui多的緩沖液的pH 值即為酪蛋白 的等電點。

3、器材

(1)水浴鍋(2)溫度計(3)200mL 錐形瓶

(4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)試管

(7)試管架(8)乳缽

4、試劑

(1)0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL

取0.4g 酪蛋白，加少量水在乳缽中仔細地研磨，將所得的蛋白質懸膠 液移入200 mL 錐形瓶內，用少量40～50℃的溫水先洗滌乳缽，將洗滌液也 移入錐形瓶內。加入10mL1mol/L 醋酸鈉溶液。把錐形瓶放入到50℃水浴中， 并小心地旋轉錐形瓶，直到酪蛋白*溶解為止。將錐形瓶內的溶液全部移 至100mL 容量瓶內，加水至刻度，塞緊玻塞，混勻。

(2) 1.00mol/L 醋酸溶液100mL

(3)0.10mol/L 醋酸溶液100mL

(4)0.01mol/L 醋酸溶液50mL

5、操作

(1)取同樣規格的試管4 支，按下表順序分別地加入各試劑，然后混勻①。

(2)向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL,加一管,搖勻一管。此時1、 2、3、4 管的pH 依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10 分 鐘后，再觀察其混濁度。zui混濁的一管的pH 即為酪蛋白的等電點。

elisa試劑盒，進口elisa試劑盒，elisa kit，進口血清，進口試劑，明膠酶譜法檢測試劑盒，大鼠elisa檢測試劑盒，人elisa檢測試劑盒-南京信帆生物技術有限公司