南京信帆生物：抗體的制備方法與原理－單克隆抗體的制備

1975年Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞與和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交瘤細胞既可產生抗體，又可無性繁殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破使血清學的研究進入了一個高度的新紀元。

　　免疫細胞化學的 技術關鍵之一是制備特異性強、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個抗原決定簇，用它免疫動物將產生對各個決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個產生抗體的細胞與一個髓瘤細胞融合而形成的雜交廇細胞經無性繁殖而來的細胞群所產生的，所以它的免疫球蛋白屬同一類型，質地純一，而且它是針對某一抗原決定簇的，因此特異性強，親合性也一致。單克隆抗體（McAb）的特性和常規血清抗體的特性比較見2-3。

表2—3 單克隆抗體（McAb）和常規免疫血清抗體的特性比較

項目

常規免疫血清抗體

McAb

抗體產生細胞

多克隆性

單克隆性

抗體的結合力

特異性識別多種抗原決定簇

特異性識別單一抗原決定簇

免疫球蛋白類別及亞類

不均一性，質地混雜

同一類屬，質地純一

特異性與親合力

批與批之間不同

特異性高，抗體均一

有效抗體含量

0.01～0.1mg/ml（小鼠腹水）

0.5～5.0mg/ml(小鼠腹水) 
0.5～10.0μg/ml（培養物上清液）

用于常規免疫學實驗

可用

單抗組合應用

抗原抗體形成格子結構（沉淀反應）

容易形成

一般難形成

抗原抗體反應

抗體混雜，形成2分子反應困難，不可逆

可形成2分子反應，可逆

　　單克隆抗體的制備方法如下。

　?。ㄒ唬﹦游锏倪x擇與免疫

　　1．動物的選擇 　純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALA/C小鼠。

　　2．免疫方案 　　選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。一般在融合前兩個月左右根據確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應根據抗原的特性不同而定。

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