III型膠原酶（含100mL酶解緩沖液）操作方法 返回列表頁

產(chǎn)品名稱：III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)操作方法
英文名稱：Type III collagenase(enzymebuffer containing100mL)
規(guī)格：10mL
產(chǎn)品貨號：FS-X0543
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉?/a>。
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)操作方法培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
      1，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
      2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
      3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

含量：    111642-200301    規(guī)格:    20mg/支
香葉醇    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111643-200301    規(guī)格:    20mg/支
*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111645-200301    規(guī)格:    20mg/支
D-半乳糖醛酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    UV法含量測定    含量：    111646-200301    規(guī)格:    20mg/支
千金藤素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111647-200301    規(guī)格:    20mg/支
異*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    11649-    規(guī)格:    20mg/支
苯甲醛    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111650-200802    規(guī)格:    20mg/支
卡維丁    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111651-200301    規(guī)格:    20mg/支
氧化槐果堿    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111652-200301    規(guī)格:    20mg/支
白鮮堿    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111654-200301    規(guī)格:    20mg/支
5-羥色胺鹽酸鹽    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111656-200401    規(guī)格:    20mg/支
烈香杜鵑油    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111657-200301    規(guī)格:    20mg/支
*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111658-200301    規(guī)格:    20mg/支
*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111659-    規(guī)格:    20mg/支
龍血素 A    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111660-200402    規(guī)格:    20mg/支
木栓酮    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111663-200401    規(guī)格:    20mg/支
表木栓醇    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    鑒別    含量：    111664-200401    規(guī)格:    20mg/支
牻牛兒酮    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111665-200902    規(guī)格:    20mg/支
二氫辣椒素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111666-200401    規(guī)格:    20mg/支
脫水卡維丁    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111667-200401    規(guī)格:    20mg/支
牡荊素鼠李糖苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111668-200401    規(guī)格:    20mg/支
老龍皮酸（網(wǎng)脊衣酸）    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量：    111669-    規(guī)格:    20mg/支
III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)操作方法松果菊苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111670-200503    規(guī)格:    20mg/支
醋酸辛酯    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111671-200602    規(guī)格:    20mg/支
焦性沒食子酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    含量測定    含量：    111672-200401    規(guī)格:    20mg/支