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    大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法

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    具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

    產(chǎn)品型號

    品       牌

    廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

    所  在  地上海市

    聯(lián)系方式:劉小姐查看聯(lián)系方式

    更新時間:2017-08-08 14:14:37瀏覽次數(shù):117次

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    產(chǎn)地 進(jìn)口 加工定制
    適用領(lǐng)域 科研
    大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。

    產(chǎn)品名稱:大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
    英文名稱:Rat pulmonary microvascular endothelial cell growth medium
    規(guī)格:100mL
    產(chǎn)品貨號:FS-X0312
    大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運輸和保存
    視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
    1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
    2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

    大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理:
    1)收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
    2)請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
    3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
    4)如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
    5)接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉?/a>。
    培養(yǎng)操作流程:
    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
    1)準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
    二.細(xì)胞處理:
    1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
    1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
    2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
    3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
    4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
    3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;
          1,細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
          2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
          3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    戊菌唑 標(biāo)準(zhǔn)品  號:66246-88-6 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    戊菌隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號:66063-05-6 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    硝草胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號:40487-42-1 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    嘧啶并三唑類磺胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號:219714-96-2 1ml    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
     87-86-5 2ml    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    氯菊酯(順反異構(gòu)體混合物) 標(biāo)準(zhǔn)品  號:52645-53-1 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    苯敵草 標(biāo)準(zhǔn)品  號:13684-63-4 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    苯醚菊酯 標(biāo)準(zhǔn)品  號:26002-80-2 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    苯氧甲基*(鉀鹽) 標(biāo)準(zhǔn)品  號:132-98-9 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    稻豐散 標(biāo)準(zhǔn)品  號:2597-O3-7 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    甲拌磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號:298-02-2 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    伏殺硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號:2310-17-0 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    亞胺硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號:732-11-6 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    磷胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號:13171-21-6 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    辛硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號:14816-18-3 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    毒莠定 標(biāo)準(zhǔn)品  號:250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    PICOLINAFEN 標(biāo)準(zhǔn)品  號:137641-05-5 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    殺鼠酮 標(biāo)準(zhǔn)品  號:83-26-1 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    增效醚 標(biāo)準(zhǔn)品  號:100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    戊草凈 標(biāo)準(zhǔn)品  號:24151-93-7 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    抗蚜威 標(biāo)準(zhǔn)品  號:23103-98-2 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
     甲基嘧啶磷 標(biāo)準(zhǔn)品  號:29232-93-7 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    多氧霉素 標(biāo)準(zhǔn)品  號:19396-06-6 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    * 標(biāo)準(zhǔn)品  號:55268-74-1 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法量:        規(guī)格:    20mg/支
     氫化* 標(biāo)準(zhǔn)品  號:50-24-8 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    甲基氟嘧磺隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號:86209-51-0 250mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
    烯丙苯噻唑 標(biāo)準(zhǔn)品  號:27605-76-1 100mg    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
        

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