elisa定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)中過失的方法

elisa定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)中過失的方法：
1、檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
2、操作前仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。
3、評(píng)估試劑盒的實(shí)用性，試劑盒的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低很重要。
4、加樣要準(zhǔn)確、快速。
5、使用校對(duì)過的微量移液器，排除自然誤差。
6、嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。
7、洗滌*，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。
8、嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間過長，酶失活，反應(yīng)時(shí)間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
實(shí)驗(yàn)過程必知小知識(shí)：
① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
② 若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)。
③ 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
④ 酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
⑤ 標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測，如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)，保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
⑥ 凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
⑦ 渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。
⑧ 反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
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