Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養 返回列表頁

Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。 
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。 
迄今為止，公司收錄背景資料清晰，細胞活力狀態良好的細胞株1420株，其中絕大部分是近年來從美國ATCC和NIH分批引進的細胞種子，少部分來自全國各地細胞研究所，細胞來源可靠，背景資料清晰，代數年輕，活力好。凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。

細胞名稱  Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養
形態特性   上皮樣
生長特性  　貼壁生長
特征特性    該細胞是采用慢病毒感染的方式使A375細胞穩定表達Cas9-Flag-Neo，經400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。
培養條件  　DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；1mM丙酮酸鈉+4mML-Glutamine；400ug/ml G418
傳代方法   1:3~1:8傳代；2~3天換液1次。
傳代情況  C3
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS　
支原體檢測  培養法（-）　
STR   Amelogenin：x,x；CSF1PO：11,12；D12S391：18,21；D13S317：11,11；D16S539：9,9；D18S51：12,17；D19S433：13,14.2；D21S11：29,30；D2S1338：16,24；D3S1358：15,17；D5S818：12,12；D6S1043：11,14；D7S820：9,9；D8S1179：11,14；FGA：23,23；Penta E：10,12；TH01：8,8；TPOX：8,10；vWA：16,17；
同工酶

染色體

使用權限 A類 
Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。
SELL Others Cynomolgus 食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0148MADB106(大鼠癌細胞)5×106cells/瓶×2

人前列腺上皮細胞裂解物HPEpiCL

1590細胞，人癌細胞系 小鼠淋巴瘤,EL-4細胞 腦靜脈血管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細胞) 5×106cells/瓶×2

HMC Pellet 人冠狀動脈平滑肌細胞團塊 > 1 mio.cells 人心臟成纖維細胞-心室裂解物HCF-av L
MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse

CM-R072大鼠腎管狀上皮細胞*培養基100mL

18. 卵巢細胞系統

小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞;SH2 小鼠腸粘膜上皮細胞*培養基 100mL

人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)

KIT Others Mouse 小鼠 c-kit / CD117 人細胞裂解液 (陽性對照)
人皮膚成纖維細胞;CCC-HSF-1

人肺成纖維細胞 (HPF)( 5×105 )

CL-0277HCC94(人子宮鱗癌細胞(高分化))5×106cells/瓶×2

人肺粘液上皮樣癌細胞;NCI-H292 大鼠表皮黑色素細胞*培養基 100mL

MFC 小鼠胃癌細胞

TFRC Others Human 人 TFRC / CD71 人細胞裂解液 (陽性對照)
沙門氏志賀氏增菌液250g用于志賀氏菌和沙門氏菌增菌培養

Nitrogen-fixingRhizobiummedium

產毒培養基 Toxin-Producing Medium 250 用于青霉、曲霉的產毒培養

TGC培養基250g/瓶用于無菌檢驗(日本)incubationmediaTGC培養基250g/瓶用于無菌檢驗(日本)

MFCAgar
半固體瓊脂26050250g供細菌動力觀察、菌種保存等用(GB4789.4-20/T4789.8-2008)。

3號抗生素培養基(Assay 肉湯) (CM0287) Oxoid incubation media 3號抗生素培養基(Assay 肉湯) (CM0287) Oxoid

扇形平菇、扁形平菇 殺蚊子 支/瓶

NutrientAgar

肉湯培養基G 250g 用于大腸桿菌、大腸菌群的檢測
Cas9穩定表達的人惡性黑色素瘤細胞；A375-Cas9-574培養氧化酶試劑細菌氧化酶試驗

亮綠瓊脂 250(g) incubation media 亮綠瓊脂 250(g)

三苯四唑*吐溫80營養瓊脂 TTC Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 250克 用于化妝品中細菌總數測定

膽硫乳瓊脂(DHL)250腸道菌選擇性培養基，特別是沙門氏菌的選擇性分離(GB、SN標準)incubationmedia膽硫乳瓊脂(DHL)250腸道菌選擇性培養基，特別是沙門氏菌的選擇性分離(GB、SN標準)

BrilliantGreenAgar

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