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    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)

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    更新時(shí)間:2017-07-17 12:46:48瀏覽次數(shù):104次

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    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)一般使用0.1×SSC做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)詳細(xì)說明書:

    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)使用方法:
    一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
    2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
    3. 37
    反應(yīng) 30 分鐘。
    4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
    5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM
    6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
    7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
    8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)確定洗膜溫度:
    一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
    1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
    2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時(shí),延長到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)步驟:
    1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
    2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
    3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
    大鼠抑制素βA(INHβA)ELISA試劑盒 ,英文名: INHβA ELISA Kit

    Mouse immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒

    MousePlaet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISAkit 小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

    CLIAKitforhumandopamine,DAELISAKIT人多巴胺規(guī)格:48T/96T

    細(xì)胞ABL1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

    ELISAKitEPO大鼠紅細(xì)胞生成素規(guī)格:48T/96T
    小鼠蛋白酶激活受體2(PAR2)ELISA試劑盒 ,英文名: PAR2 ELISA Kit

    人血凝素(HA)ELISA檢測試劑盒Humanhemagglutinin,HAELISAKit 96T/48T

    大鼠*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)免疫試劑盒 Rat Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA kit

    英文名稱RatMethylaseELISAKit大鼠甲基化酶(Methylase)規(guī)格:96T/48T

    酵母鉀離子(K)濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20

    ELISAKitSMAF人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子規(guī)格:48T/96T
    小鼠*過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    Human retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 人*結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒

    Humanadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit 人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

    HumanAnti-SomaticMuscleAntibody,ASAELISA試劑盒人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    植物細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒10

    Humantrueinsulin,TIELISAKit人真胰島素(TI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
    9R-HODE cholesteryl ester 25 ug     9R-xy7noxy-10E12Z-octadecadienoic acid cholesteryl ester 9R-HODE cholesteryl ester

    SGI-1776 1 mg     Pim-Kinase Inhibitor IX N-[1-metxyl-4-piperidinylmetxyl]-3-[3-trifluorometxoxypxenyl]-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine

    Annexin V-iFluor 594偶聯(lián)物     Annexin V-iFluor 594 conjugate

    Nervonoyl Ethanolamide 5 mg     N-2-xy7noxyetxyl-15Z-tetracosenamide Nervonoyl Ethanolamide

    α-Linolenoyl Ethanolamide 10 mg     N-2-xy7noxyetxyl-9Z12Z15Z-octadecatrienamide α-Linolenoyl Ethanolamide

    Aerosporin Mastimyxin     Polymyxin B sulfate
    GRF (1-29) amide (rat)His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-NH2

    α-Melanocyte Stimulating Hormone [Met5, Pro6, D-Phe7, D-Trp9, Phe10] (5-13) (MSHa)Met-Pro-D-Phe-Arg-D-Trp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2

    [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)Ser-Glu-Ile-Gln-Phe-Nle-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Ser-Ser-Nle-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Tyr- NH2

    Biotin-Pancreatic Polypeptide, humanBiotin-Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asn-Ala-Thr-Pro-Glu-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Asp-Leu-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Met-Leu-Thr-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2

    PACAP (1-38), human, ovine, ratHis-Ser-Asp-Gly-Ile-Phe-Thr-Asp-Ser-Tyr-Ser-Arg-Tyr-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-Gly-Lys-Arg-Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys-NH2
    尼龍膜,13×20cm1張?zhí)攸c(diǎn)本磺酰錄Benzenesulfonyl chlorideAR500mL

    0322-100g以兒按四乙酸60-00-4100g0

    MDL25-500GYeast Extract 酵母粉119-44-8500g

    2xPfu PCRmix Master1ml(with dye)

    L-Glutamic Acid100g

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