變性蛋白裂解液50ml實驗方法 返回列表頁

變性蛋白裂解液50ml實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
變性蛋白裂解液50ml實驗方法操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm，發射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
變性蛋白裂解液50ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白 (His 標簽)

大鼠食管平滑肌細胞*培養基 100mL

REG4 Others Rat 大鼠 REG4 人細胞裂解液 (陽性對照)

A7r5 大鼠胸大動脈平滑肌細胞 A7r5 rat thoracic aortic smooth muscle cells 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

人肺間充質干細胞HPMSC

WTRL1(大鼠肺細胞) 5×106cells/瓶×2 原代肝實質細胞特制基礎培養基Many types of cells包裝：500/250/100ml
大鼠骨髓瘤細胞;Y3-Ag 1.2.3

CRP Others Human 人 CRP / C-Reactive Protein 人細胞裂解液 (陽性對照)

AsPC-1 人轉移胰腺腺癌細胞

HuH-6人肝母細胞瘤細胞 HuH-6 human hepatoblastoma cell DMEM+10% FBS

BMP2 Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 BMP-2 / BMP2A 蛋白

人腎臟上皮細胞(HREpiC)( 5×105 ) MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse
TERF1 Others Human 人 TERF1 / TRF1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人羊膜上皮細胞cDNAHAmEpiC cDNA

正常大鼠腎細胞(EGF受體陽性);NRK49F

AGS細胞，胃腺癌細胞 人喉癌細胞,TU 686細胞 大鼠垂體瘤細胞;MMQ

雜交瘤(B類);Z1510C6D10F4G6

TREM2 Others Human 人 TREM2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人神經軸突絲蛋白(NAFP)自身抗體免疫試劑盒 Human neuron axon filament protein(NAFP)autoantibody ELISA kit

MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒規格：96T/48T

人抗丙型肝炎病毒抗體(anti-HCV)ELISA試劑盒規格：96T/48T

humanMAXdimerizationprotein1,mxd1ELISA試劑盒人MAX二聚化蛋白1(mxd1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Humanplacentalactogen,HPLELISAKit人胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒規格：96T/48T
人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand 1 (TRAIL-R1) ELISA Kit 大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒

HumanHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit 人熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanInfluenzavirusesA,FLUAELISA試劑盒人流感病毒A(FLUA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-2)*明膠法比色定量檢測試劑盒20次

HumanLeptospiraIgG，LepIgGELISAKit人鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISA試劑盒規格：96T/48T
變性蛋白裂解液50ml實驗方法大鼠甘露糖受體（MR）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠甘露糖結合凝集素（MBL）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠干細胞因子受體(SCFR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝