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    組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實(shí)驗(yàn)方法

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    更新時(shí)間:2017-07-10 11:50:37瀏覽次數(shù):205次

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    組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
    1、液的配制:
    六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
    2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
        把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
    3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
    1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
    2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
    3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
    437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
    5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
    6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
    組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
    1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
    2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
    3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
    4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
    5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
    6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
    7PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
    EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

    人牙周膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

    IL13RA1 Others Rat 大鼠 IL13RA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

    T6-Swiss albino細(xì)胞,小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 B16(小鼠黑色素瘤細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1

    間充質(zhì)干細(xì)胞成骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)添加物MODS

    HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 頜下腺上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
    大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;A7r5

    CSNK2A1 Others Mouse 小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

    肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

    小鼠神經(jīng)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人肺癌細(xì)胞,NCI-H596[H596]細(xì)胞 NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞)

    人肝癌細(xì)胞;SMMC-7721

    IL7R Others Mouse 小鼠 IL7Ra / CD127 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
    LAMP2 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

    人心肌細(xì)胞總RNAHCM tRNA

    豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1

    AsPc-1細(xì)胞,人轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞 人正常皮膚細(xì)胞,HaCaT細(xì)胞 小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9

    HSC-T6(大鼠肝星形細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

    Gibco 17101015 Collagenase Type II 1g
    小鼠二肽基肽酶9(DPP9)ELISA試劑盒 ,英文名: DPP9 ELISA Kit

    人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanGrowthHormoneBindingProtein,GHBPELISAKit 96T/48T

    大鼠前列腺特異性抗原(PSA)免疫試劑盒 Rat prostate specific antigen,PSA ELISA Kit

    英文名稱RatANCAELISAKit大鼠抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)規(guī)格:96T/48T

    甲醛變性RNA垂直電泳全套試劑盒10

    人胃癌標(biāo)志物ELISAKit人胃癌標(biāo)志物ELISAKit48T/96T人胃癌標(biāo)志物ELISAKit48T/96T規(guī)格:48T/96T
    人中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

    Human lipoprotein associated phospholipase A2 (Lp-PL-A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒

    HumanMethylaseELISAKit 人甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

    HumanHyaluronicacid,HAELISA試劑盒人透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

    組織肌酐(CREATININE)化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

    HumanLipoxinA4,LXA4ELISAKit人脂氧素A4(LXA4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
    組織蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實(shí)驗(yàn)方法大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

    大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

    大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

    大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

     

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