組織蛋白快速提取試劑盒（離心柱法）50T實驗方法 返回列表頁

組織蛋白快速提取試劑盒（離心柱法）50T實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
組織蛋白快速提取試劑盒（離心柱法）50T實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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人小梁網(wǎng)細胞*培養(yǎng)基 100mL

CLMP Others Rat 大鼠 ASAM / CLMP 人細胞裂解液 (陽性對照)

CMT93細胞，小鼠結腸癌細胞 NCL-H460(非小細胞肺癌) 水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S4

I 型膠原細胞檢測試劑盒Col

HCC94(人子宮鱗癌細胞(高分化)) 5×106cells/瓶×2 肝動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
髓核細胞培養(yǎng)基NPCM

CST1 Others Human 人 CST1 / Cystatin-1 / Cystatin-SN 人細胞裂解液 (陽性對照)

GPH4 豚鼠心肌來源細胞

CM-M014小鼠氣管和支氣管上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0909 人軟骨細胞*培養(yǎng)基 100mL
HEPACAM2 Others Rat 大鼠 HepaCAM2 人細胞裂解液 (陽性對照)

人心肌細胞-RNAHCM-a miRNA5 μg

人心肌成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

PC-12細胞，大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) HT-29(結腸癌細胞) 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞;HEC-1-B

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF1b 蛋白 (Fc 標簽)

SVEC4-10(小鼠淋巴結內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
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