植物種子蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實驗方法 返回列表頁

植物種子蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
植物種子蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實驗方法操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm，發射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
植物種子蛋白提取試劑盒（2D電泳用）100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2

SD大鼠骨髓間質干細胞 SD rat bone marrow mesenchymal stem cells

CFHR1 Others Human 人 CFHR1 人細胞裂解液 (陽性對照)

MV3細胞，人黑色素瘤細胞 嗜酸乳桿菌 人骨肉瘤細胞;HOS

人胚胎胰腺組織來源細胞;CCC-HPE-2

J82(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2 LncaP, 人前列腺癌細胞 人腦瘤細胞;SF763
神經元細胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml)

EPHB1 Others Human 人 EPHB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照)

OP9 小鼠骨髓基質細胞

豬腎細胞;PK-15

BPH-1, 人前列腺增生細胞

人結直腸癌細胞;T84 大鼠甲狀腺上皮細胞*培養基 100mL
CHEK2 Others Mouse 小鼠 CHK2 / CHEK2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人前脂肪細胞-內臟裂解物HPA-v L

綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞;U14-GFP

JAR細胞，胎盤絨毛癌細胞 人食管鱗癌,KYSE30細胞 中國倉鼠卵巢細胞系;pDSr a2-mpl-X

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D3

TGFB1 Others Human 人 latent TGFβ1 人細胞裂解液 (陽性對照)
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