劉氏染色試劑盒（Liu Stain）300ml實(shí)驗(yàn)方法 返回列表頁(yè)

劉氏染色試劑盒(Liu Stain)300ml實(shí)驗(yàn)方法H-97(人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

人胚肺成纖維細(xì)胞;CCC-HPF-1

CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

GES細(xì)胞，人腎上皮細(xì)胞 小鼠B淋巴細(xì)胞,WEHI 231細(xì)胞 CL-0454TE-11(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞

hCD34+-CB-c pooled 臍帶血來源的人類造血祖細(xì)胞，混合來源 100000 人脊柱間充質(zhì)干細(xì)胞HVMSC

劉氏染色試劑盒(Liu Stain)300ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng) 離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
劉氏染色試劑盒(Liu Stain)300ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
劉氏染色試劑盒(Liu Stain)300ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞HRGEC

HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

Raji人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 Raji human Burkitt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

FGF12 Protein Canine 重組狗 FGF12 蛋白

AML-193(人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)細(xì)胞HN
CD47 Others Human 人 CD47 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

3T3TK細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞 TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞,JEG-3-VP16-TNFa細(xì)胞 人滑膜細(xì)胞RNAHS miRNA5 μg

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1

EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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脯酸(PRO)含量測(cè)試盒 可見分光光度法 可見分光光度法

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