甲苯胺藍染色液（0.5%,硼酸鹽法）100ml實驗方法 返回列表頁

甲苯胺藍染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
甲苯胺藍染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實驗方法操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養細胞并誘導細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發波長546nm，發射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=546 nm; 發射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
甲苯胺藍染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
SK-OV-3(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12]

EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 人細胞裂解液 (陽性對照)

MRC-5細胞，人胚肺細胞 大鼠肺上皮Ⅱ型細胞,RLE-6TN細胞 T-109B彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL

胰腺導管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

HUVEC-c Growth Medium 2 pooled 500,000cells 肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
CM-R087大鼠軟骨細胞*培養基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠海馬趾星形膠質細胞MA-h

猴腎細胞;Vero IgCD4 人巨核細胞白血病，CHRF細胞 SK-N-MC(神經上皮瘤細胞)

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0928

GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細胞裂解液 (陽性對照)
人成纖維細胞(HMF)(5×105)

人骨肉瘤細胞;HOS

CM-H112人脂肪細胞*培養基100mL

小鼠漿細胞瘤;MPC-11 小鼠直腸平滑肌細胞*培養基 100mL

rEPC，大鼠內皮祖細胞-骨髓 Rattus

EPHA6 Others Mouse 小鼠 EPHA6 / EHK-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠基質金屬蛋白酶19(MMP19)ELISA試劑盒 ，英文名： MMP19 ELISA Kit

人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA檢測試劑盒Humanadenosinedeaminase,ADAELISAKit 96T/48T

大鼠纖連蛋白(FN)免疫試劑盒 Rat Fibronectin,FN ELISA Kit

英文名稱RatangiotensionIELISAKit大鼠血管緊張素I(AngI)規格：96T/48T

果菜類植酸比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKiongin人延伸蛋白規格：48T/96T
小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人維生素C(VC)ELISA試劑盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanchemerinELISA試劑盒人chemerinELISA試劑盒規格：96T/48T

轉基因玉米NK603品系基因檢測試劑盒20次

Humanserineprotease，PRSSELISAKit人*蛋白酶(PRSS)ELISA試劑盒規格：96T/48T
甲苯胺藍染色液(0.5%,硼酸鹽法)100ml實驗方法人上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人上腺素(EPI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人病蛋白(nephrin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝