細胞色素氧化酶染色試劑盒（對苯二銨法）5×50ml實驗方法 返回列表頁

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細胞色素氧化酶染色試劑盒(對苯二銨法)5×50ml實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
細胞色素氧化酶染色試劑盒(對苯二銨法)5×50ml實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
KLE(人子宮內(nèi)膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1

SLAMF1 Others Rat 大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 人細胞裂解液 (陽性對照)

QGY-7703細胞，人肝癌細胞 人羊膜細胞,WISH細胞 大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106

人氣管上皮細胞cDNAHTEpiC cDNA

Promocell C-28010 Mesenchymal Stem CellGrowth Medium, 間充質(zhì)干細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml
猴腎細胞;vero IgRCD4-

IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0205Sf-9(昆蟲細胞)5×106cells/瓶×2

Dami細胞，巨核細胞 人分泌A2抗體B淋巴細胞,BB7.2細胞 人導(dǎo)管癌細胞;HCC38

A673(人橫紋肌瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD22 Others Mouse 小鼠 Siglec-2 / CD22 人細胞裂解液 (陽性對照)

人非小細胞肺癌細胞;NCI-H23

HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞

M17細胞，神經(jīng)母細胞瘤細胞 非雄激素依賴型前列腺癌細胞,Tsu-Prl細胞 人神經(jīng)束膜細胞RNAHPC miRNA5 μg

非洲綠猴腎細胞;VERO

EPOR Others Human 人 EPOR / Erythropoietin Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人旋毛蟲抗體(Trichinella Ab)免疫試劑盒 Human Trichinella antibody ELISA Kit

人抗DNA酶B抗體(anti-DNase B)ELISA試劑盒 ，英文名： anti-DNase B ELISA Kit

Ratleukemiainhibitoryfactor,LIFELISA試劑盒大鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISA試劑盒人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanLaminin，LNELISAKit人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠雌激素(E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human carbohydrate antigen 19-9 (CA19-9) ELISA Kit 人糖鏈抗原19-9(CA19-9)ELISA試劑盒

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植物總ATP酶(totalATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

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