絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T使用說明書 返回列表頁

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絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T使用說明書儲(chǔ)存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液室溫保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

絲狀真菌蛋白提取試劑盒適用于從各種絲狀真菌中提取總蛋白。優(yōu)化的裂解液配方可以充分釋放各種有隔膜菌絲和無隔膜菌絲蛋白以及各種菌絲體蛋白，提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了。提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

本試劑盒提取的蛋白不可用于2D電泳。

絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
絲狀真菌蛋白提取試劑盒100T使用說明書注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
海芒果Cerbera manghas Theviridoside 黃夾苦甙 23407-76-3 C17H24O11 ≥95%

異甘草苷Isoliquiritin2041-81-620mg

苦蒿素 Blinin 125675-09-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

檢查*中間體100887-200601常溫，避光20mg

(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷 (+)-pinoresinol-β-D-glucoside 69251-96-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
2-O-沒食子酰級(jí)金絲桃 2-O-galloylfundwirepeach 504

雷帕霉速Rapamycin2313-88-920mg

Loganin 馬錢苷 18524-94-2

花青素錄化矢車菊素Cyanidin Chloride

土荊皮乙酸;Pseudolaric Ac 82508-31-4 20mg 訂購|咨詢
蟾蜍 Bufo bufo gargarizans Cantor ocinobufagin 遠(yuǎn)華蟾蜍精 472-26-4 C24H34O5 ≥98%

氧基白屈菜紅減qthoxychqlqrythrinq79229-22-020mg

路路通酸;樺木同酸;樺脂酸;樺脂同酸 Betulonicacid 4481-62-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

含量測定* 100865-200601常溫，避光100mg

新補(bǔ)骨脂異黃酮 Neobavaisoflavone 41060-15-5 20mg HPLC≥98% 新補(bǔ)骨脂異黃酮用于含量測定
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